Μέθοδος διασποράς σε τρυβλίο και καθαρές καλλιέργειες.

Εσείς: Κύριε Δρ. Σπένσερ, τώρα που ποσοτικοποιήσαμε το βακτηριακό φορτίο, ποιο είναι το επόμενο βήμα;

Δρ. Σπένσερ: Πρέπει να απομονώσουμε καθαρές καλλιέργειες για περαιτέρω δοκιμές. Αυτό είναι κρίσιμο, γιατί πρέπει να διασφαλίσουμε ότι τα βακτήρια που μελετάμε δεν είναι αναμεμειγμένα με άλλα είδη. Έτσι μπορούμε να αναγνωρίσουμε με ακρίβεια το παθογόνο που ευθύνεται για την επιμόλυνση. Όταν εργάζεστε με πιθανώς μικτές καλλιέργειες, όπως τα αρχικά μας δείγματα, υπάρχει κίνδυνος παρεμβολής από άλλα βακτήρια, που μπορεί να αλλοιώσουν τα αποτελέσματα ή να οδηγήσουν σε λανθασμένη ταυτοποίηση.

Σαμ: Δεν πρέπει να εκτελέσουμε τη μέθοδο διασποράς σε τρυβλίο (streak plate method) για να απομονώσουμε καθαρές καλλιέργειες;

Εσείς: Σωστά, θυμάμαι ότι το είχαμε διδαχθεί στο μάθημα. Καλύτερα όμως να εξασκηθούμε πρώτα πριν χρησιμοποιήσουμε τα πραγματικά δείγματα. Προχωράτε λοιπόν στην εξάσκηση, χρησιμοποιώντας το εργαλείο προσομοίωσης στο διαδίκτυο:

https://webcampus.med.drexel.edu/simulation/microbiology/lab1/ και παρακολουθείτε επίσης ένα βίντεο.

Αφού αισθάνεστε σίγουροι ότι θυμάστε πώς εκτελείται η μέθοδος διασποράς σε τρυβλίο, προχωράτε στη συλλογή του απαραίτητου εξοπλισμού και εκτελείτε την τεχνική, ακολουθώντας τα παρακάτω βήματα.

• Υλικά
• Τρυβλία LB άγαρ
• Λύχνοι Bunsen
• Βρόχοι εμβολιασμού
• Πιπέτα 200 mL με αποστειρωμένες άκρες
• Μαρκαδόροι για σήμανση
• Διαδικασία
• Επισημάνετε τον πυθμένα του τρυβλίου άγαρ με τις σχετικές πληροφορίες, όπως την ημερομηνία και την ταυτότητα του δείγματος.
• Αποστειρώστε τον βρόχο εμβολιασμού περνώντας τον μέσα από τη φλόγα του λύχνου Bunsen μέχρι να κοκκινίσει.
• Αφήστε τον να κρυώσει για λίγο.
• Βυθίστε τον ψυχθέντα βρόχο στο δείγμα που περιέχει τη μικτή καλλιέργεια.
• Απλώστε απαλά τον βρόχο κατά μήκος ενός τεταρτημορίου (περίπου του ενός τετάρτου) της επιφάνειας του άγαρ, σχηματίζοντας παράλληλες γραμμές ή ένα ζιγκ-ζαγκ μοτίβο.
• Αποστειρώστε ξανά τον βρόχο στη φλόγα και αφήστε τον να κρυώσει.
• Περιστρέψτε το τρυβλίο περίπου 90°, επικαλύπτοντας ελαφρά τον πρώτο τομέα, και εμβολιάστε έναν δεύτερο καθαρό τομέα της πλάκας με τον βρόχο.
• Δημιουργήστε ένα νέο σύνολο γραμμών σε αυτόν τον δεύτερο τομέα.
• Επαναλάβετε τη διαδικασία για τους υπόλοιπους τομείς: αποστειρώστε και ψύξτε τον βρόχο, περιστρέψτε ξανά το τρυβλίο και εμβολιάστε τον τρίτο τομέα, επικαλύπτοντας ελαφρά τον προηγούμενο.
• Συνεχίστε με έναν τέταρτο και τελευταίο τομέα, αποστειρώνοντας τον βρόχο κάθε φορά μεταξύ των τομέων.
• Κλείστε το τρυβλίο άγαρ, αναποδογυρίστε το (με το καπάκι προς τα κάτω) και επωάστε το στους 37°C για μία νύχτα.