Eșantion de suprafață mai mare și când sunt necesare informații despre suprafață

Prof. Ionașcu: Corect, folosim SEM atunci când avem nevoie de informații despre suprafață și nu despre structura internă! TEM ar fi ideal pentru a vizualiza componentele membranei celulare, organitele celulare, proteinele, fibrele citoscheletului. De aSEMenea, nu puTEM vizualiza specimene vii cu SEM sau TEM. Acest lucru se datorează faptului că probele TEM sunt fixate cu coloranți de metale grele, iar probele SEM sunt acoperite cu ioni de aur sau paladiu.

Tu: Cum pregătim lamelele pentru un microscop electronic? Procesul este același cu cel pe care l-am urmat pentru microscopul optic?

Prof. Ionașcu: De fapt, procesul este mult mai lung și mai complex. Să prezentăm principalele părți.

1. Fixare: În primul rând, trebuie să păstrați țesutul biologic sau celulele în starea lor actuală. Aceasta implică de obicei utilizarea fixatorilor chimici - adesea glutaraldehidă - urmată de post-fixare cu tetroxid de osmiu pentru a stabiliza structurile celulare.
2. Deshidratare: Apoi, se elimină apa din probă printr-o serie de soluții gradate de etanol (sau acetonă). Această etapă previne distorsiunea sau colapsul structurilor delicate odată ce proba este plasată în vid.
3. Încorporare: După deshidratare, specimenul se încorporează într-o rășină (pentru TEM) sau se așează pe un suport adecvat (pentru SEM). Pentru TEM, rășina oferă un mediu solid în care se pot tăia secțiuni ultrasubțiri.
4. Secționare (doar TEM): Folosind un ultramicrotom, se produc felii foarte subțiri - de obicei cu o grosime de aproximativ 70 nm. Aceste secțiuni sunt transferate pe grile concepute pentru microscopie electronică.
5. Colorare: Metalele grele (de exemplu, acetat de uranil, citrat de plumb) sunt utilizate pentru a crește contrastul și a evidenția detaliile fine. Aceste colorante se leagă de diverse componente celulare, facilitând distingerea lor sub fasciculul de electroni. Pentru prepararea grilei TEM, este important să se utilizeze o pensetă inversată pentru a ține grila cu partea cu carbon în sus. Folosind o pipetă , adăugați proba pe grilă, așteptați 60 de secunde și utilizați o hârtie absorbantă pentru a îndepărta excesul de soluție. Repetați procesul cu apă pură și absorbiți excesul de soluție (etapa de spălare), apoi repetați pasul cu colorantul pentru metale grele și absorbiți pata. Depozitați grila într-o cutie cu grilă.
6. Montare și acoperire (specifică SEM): Dacă pregătiți o mostră pentru SEM, o puteți fixa pe un știft de aluminiu. Adesea, aplicați un strat subțire de metal conductiv - cum ar fi aurul sau paladiul - pentru a îmbunătăți calitatea imaginii și a preveni încărcarea în fasciculul de electroni.
7. Imagistică: În final, plasați proba preparată în camera de vid a electromiografiei și ajustați setările instrumentului (de exemplu, energia fasciculului, dimensiunea spotului) pentru a capta nivelul de mărire și rezoluția dorite.

Prin acești pași, păstrați și îmbunătățiți caracteristicile specimenului, asigurând cele mai precise și detaliate imagini.