Método de siembra en estría y cultivos puros

Tú: Dr. Losada, ahora que hemos cuantificado la carga bacteriana, ¿cuál es el siguiente paso? 

Dr. Losada: Necesitamos aislar cultivos puros para realizar pruebas adicionales. Es crucial porque debemos asegurarnos de que las bacterias que estudiamos no estén mezcladas con otros tipos. De este modo podremos identificar con precisión el patógeno responsable de la contaminación. Cuando se trabaja con cultivos potencialmente mixtos, como nuestras muestras iniciales, existe el riesgo de interferencia de otras bacterias, lo que puede sesgar los resultados o llevar a identificaciones erróneas.

Samuel: ¿No necesitamos realizar el método de estría en placa para aislar cultivos puros??

Tú: Así es, recuerdo que lo aprendimos en clase. Mejor practiquemos antes de usar las muestras reales.

Procedéis a practicar usando la herramienta de simulación en línea: 

https://webcampus.med.drexel.edu/simulation/microbiology/lab1/ y también veis un video.

Confiados en que recordáis cómo realizar el método de estría en placa, sacáis el material necesario y ejecutáis la técnica siguiendo los siguientes pasos:

Material 

• Placas de agar LB 

• Mecheros Bunsen

• Asas de inoculación

• Micropipeta de 200mL con puntas estériles

• Rotuladores

Procedimiento:

• Etiqueta la base de la placa de agar con la información pertinente, incluida la fecha y la identidad del espécimen.

• Esteriliza el asa de inoculación pasándola por la llama del mechero Bunsen hasta que esté al rojo. Déjala enfriar brevemente.

• Introduce el asa ya fría en la muestra que contiene el cultivo mixto.

• Estría suavemente con el asa un cuadrante (aprox. una cuarta parte) de la superficie del agar, creando líneas paralelas o un patrón en zigzag.

• Flamea de nuevo el asa para esterilizarla y deja que se enfríe tras la llama.

• Para inocular el segundo sector, gira la placa unos 90°. Solapa ligeramente el primer sector estriado y luego estría en una segunda zona estéril de la placa usando el asa.

• Realiza otro conjunto de estrías dentro de este nuevo sector.

• Repite el proceso para los sectores restantes. Esteriliza y enfría el asa una vez más. Gira la placa de nuevo y estría en un tercer sector, solapando ligeramente el anterior.

• Continúa para crear un cuarto y último conjunto de estrías, asegurándote de esterilizar el asa entre cada conjunto.

• Cierra la placa de agar, inviértela e incúbala a 37 °C durante la noche.