Επίδραση της θερμοκρασίας στη δραστικότητα της αμυλάσης

Καθηγητής Wilson: Τώρα θα δοκιμάσετε τη δραστικότητα της αμυλάσης σε διαφορετικές θερμοκρασίες, χρησιμοποιώντας το βέλτιστο ρυθμιστικό διάλυμα pH 7,0. Θα χρησιμοποιήσετε και πάλι διάλυμα ιωδίου για να χρωματίσετε το άμυλο με σκούρο μπλε χρώμα και θα πρέπει να παρατηρήσετε την αλλαγή του χρώματος σε ανοιχτό κίτρινο, που υποδηλώνει την παρουσία μαλτόζης.

Σας παρέχονται τα ακόλουθα για να αρχίσετε να προετοιμάζετε τα δείγματά σας:

1. Χρονόμετρο

2. Πάγος (4°C)

3. Υδρόλουτρο στους 22°C

4. Υδρόλουτρο στους 37°C

5. Υδρόλουτρο στους 100 °C

6. Γυάλινοι δοκιμαστικοί σωλήνες

7. Μαρκαδόρος

8. Πιπέτες Pasteur

9. Διάλυμα I2/KI

10. Διάλυμα αμυλάσης

11. Διάλυμα αμύλου 1%

12. Ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών 1Μ σε pH 7,0

Ακολουθείτε τα παρακάτω βήματα:

1. Χαρακτηρίστε τέσσερις γυάλινους δοκιμαστικούς σωλήνες ως 1S, 2S, 3S, 4S, χρησιμοποιώντας έναν μαρκαδόρο. Προσθέστε 4 ml διαλύματος αμύλου 1% σε κάθε έναν αντίστοιχα, χρησιμοποιώντας πιπέτα Pasteur. Προσθέστε 0,5 ml διαλυμάτων ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών 1Μ σε pH 7,0 σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα.

2. Τοποθετήστε αυτούς τους τέσσερις δοκιμαστικούς σωλήνες όπως αναφέρεται παρακάτω, για 20 λεπτά:

1. Σωλήνας 1S σε υδατόλουτρο 100 °C
2. Σωλήνας 2S σε υδατόλουτρο 22 °C
3. Σωλήνας 3S σε υδατόλουτρο 37 °C
4. Σωλήνας 4S σε πάγο (4 °C)

3. Σημειώστε άλλους τέσσερις γυάλινους δοκιμαστικούς σωλήνες ως 1E, 2E, 3E, 4E, χρησιμοποιώντας έναν μαρκαδόρο. Προσθέστε διάλυμα αμυλάσης σε κάθε έναν αντίστοιχα.

4. Τοποθετήστε αυτούς τους τέσσερις δοκιμαστικούς σωλήνες όπως αναφέρεται παρακάτω, για 20 λεπτά:

1. Σωλήνα 1E σε υδατόλουτρο 100 °C
2. Σωλήνας 2E σε υδατόλουτρο 22 °C
3. Σωλήνας 3E σε υδατόλουτρο 37 °C
4. Σωλήνας 4E σε πάγο (4 °C)

5. Ετοιμάστε έξι νέους γυάλινους σωλήνες και επισημάνετέ τους ως 0 λεπτά, 2 λεπτά, 4 λεπτά, 6 λεπτά, 8 λεπτά, 10 λεπτά, χρησιμοποιώντας έναν μαρκαδόρο.  Χρησιμοποιώντας πιπέτα pasteur, προσθέστε μία σταγόνα διαλύματος I2/KI.

6. Ανακατέψτε τα περιεχόμενα κάθε δοκιμαστικού σωλήνα 1S και 1E και τοποθετήστε τα ξανά στο υδατόλουτρο στους 100 °C. Εκκινήστε το χρονόμετρο.

7. Συλλέξτε αμέσως 0,5 ml αυτού του μείγματος διαλυμάτων και προσθέστε το στον γυάλινο δοκιμαστικό σωλήνα με την ένδειξη 0 λεπτά. Παρατηρήστε την αλλαγή του χρώματος.

8. Επαναλάβετε το βήμα 7 για τους υπόλοιπους γυάλινους δοκιμαστικούς σωλήνες έως ότου συμπληρωθούν 10 λεπτά. Παρατηρήστε τυχόν αλλαγές στο χρώμα του μείγματος και καταγράψτε το χρόνο που χρειάστηκε για να γίνει το σκούρο μπλε χρώμα ανοιχτό κίτρινο για κάθε αντίδραση.

9. Επαναλάβετε τα βήματα 2 - 5 στους 37 °C

10. Επαναλάβετε τα βήματα 2 - 5 στους 22 °C

11. Επαναλάβετε τα βήματα 2 - 5 στους 4 °C

12. Υπολογίστε τον ρυθμό κάθε αντίδρασης χρησιμοποιώντας τον τύπο 1/t.