Experimento #1: Medición del crecimiento bacteriano mediante densidad óptica

Dra. Gómez: Muy bien. Centrémonos ahora en el experimento que realmente se beneficia de un espectrofotómetro: medir el crecimiento bacteriano mediante densidad óptica. Esto nos permite seguir cómo cambia la densidad celular de la muestra a lo largo del tiempo, dándonos una indicación clara de los patrones de crecimiento.

Señala un matraz que contiene el cultivo bacteriano.

Dra. Gómez: Repasemos el montaje. Primero, tomemos una alícuota del cultivo, pipeteando cuidadosamente una pequeña cantidad en una cubeta limpia y eliminando cualquier gota o huella. Luego colocaremos la cubeta dentro del espectrofotómetro, asegurándonos de poner a cero la máquina con un caldo equivalente que no contenga bacterias.

Aquí se presentan los pasos a seguir:

1. Selecciona la longitud de onda deseada según lo que estés midiendo.
3. Inserta una cubeta llena solo con el disolvente o medio y pulsa el botón para poner a cero el instrumento. Esto compensa cualquier absorbancia no causada por tu muestra.
4. Llena con cuidado una segunda cubeta con tu muestra. Sujétala por las caras esmeriladas para evitar huellas en la trayectoria óptica.
5.Inserta la cubeta de muestra, cierra la tapa o la cámara y espera a que los valores de absorbancia o transmitancia se estabilicen.
6. Registra los resultados en tu cuaderno o en el ordenador.

Una de las estudiantes, Sara, levanta una cubeta: Dra. Gómez, ¿con qué frecuencia deberíamos medir la densidad óptica?

Dra. Gómez: ¡Buena pregunta! Normalmente puedes medir a intervalos fijos, por ejemplo, cada 30 minutos o cada hora, para ver cómo de rápido o lento crece el cultivo. Recuerda anotar los valores en tu cuaderno. A medida que aumenta la población celular, los valores subirán. Podéis ver un ejemplo a continuación.

Los estudiantes niegan con la cabeza, y la Dra. Gómez da un paso atrás, con gesto de ánimo. 

Ejemplo de curva de crecimiento de Escherichia coli de densidad óptica a 600 nm (OD600). https://www.jove.com/v/10511/growth-curves-cfu-and-optical-density-measurements