Πέψη DNA με Περιοριστικές Ενδονουκλεάσες : Βέλτιστες Συνθήκες

Αφού καθορίσατε τη σημασία της σωστής επιλογής περιοριστικού ενζύμου, εσύ και ο Eρίκκος είστε έτοιμοι να προχωρήσετε στις πρακτικές πτυχές της πέψης. Πριν ξεκινήσετε τη διαδικασία, η Δρ Κρίνη σας καλεί και τους δύο για μια συζήτηση σχετικά με την προετοιμασία των αντιδραστηρίων και τις βέλτιστες συνθήκες για το πείραμα.

Δρ Κρίνη: Πριν ξεκινήσουμε το πείραμα, πρέπει να συζητήσουμε τα αντιδραστήρια που θα χρησιμοποιήσουμε και τις βέλτιστες συνθήκες για την εκτέλεση του πειράματος. Αυτό περιλαμβάνει παράγοντες όπως το pH και η θερμοκρασία. Θυμάστε τα αντιδραστήρια και τις βέλτιστες συνθήκες για την περιοριστική πέψη ενδονουκλεάσης DNA με το EcoRI;

Εσείς: Είναι μια αρκετά απλή ρύθμιση, όσο θυμάμαι. Χρειαζόμαστε μόνο το DNA από τον ύποπτο, το περιοριστικό ένζυμο, μια διάλυση ρυθμιστικού διαλύματος και νερό.

Δρ Κρίνη: Σωστά! Τι γίνεται με τις συνθήκες του πειράματος;

Eρίκκος: Δεν χρειάζεται να εκτελέσουμε το πείραμα σε pH 7,5; Γι' αυτό το διάλυμα ρυθμιστικού διαλύματος είναι απαραίτητο και πρέπει να το αφήσουμε να επωαστεί στους 37°C.

Εσείς: Αυτό φαίνεται σωστό, Δρ Κρίνη. Συμφωνείτε;

Δρ Κρίνη: Μπράβο, σωστά το είπατε! Θυμάστε γιατί είναι σημαντικό να εκτελέσουμε το πείραμα σε αυτή τη θερμοκρασία και το pH;