Experimento de PCR

Decides ver un video para ayudarte a visualizar cómo realizar el experimento antes de configurar tu propia reacción: 

Posteriormente, procedes a analizar el ADN aislado para detectar el transgén de noveltin utilizando PCR. Usas un control positivo para la reacción, que es ADN aislado de un ratón previamente determinado como portador del transgén. Para tu control negativo, utilizas agua destilada en lugar de una muestra de ADN. La longitud del fragmento de ADN amplificado que se espera es de 370 pares de bases (pb).

Preparas la mezcla de reacción como sigue:

• 1,25 μl de buffer de polimerasa A y 1,25 μl de buffer de polimerasa B (kit KAPA Taq PCR).
• 5 μl de ADN molde.
• 1 μl de cebadores forward y reverse, respectivamente.
• 0,5 μl de dNTPs (kit KAPA Taq PCR).
• 0,1 μl de ADN polimerasa KAPA Taq (kit KAPA Taq PCR).
• Volumen final de reacción de 25 μl con agua destilada.

Configuras la máquina de PCR con las siguientes condiciones:

• Desnaturalización: un ciclo a 95°C durante 3 minutos, seguido de 35 ciclos a 95°C durante 1 minuto.
• Alineación: 65°C durante 1 minuto, 72°C durante 1 minuto.
• Extensión: seguido de una extensión final a 72°C durante 10 minutos.