Σπορά των κυττάρων

Ο Dr. Lee συγκεντρώνει την ομάδα γύρω από τον αποστειρωμένο θάλαμο, όπου υπάρχουν ετικετοποιημένες πλάκες 24 κοιλοτήτων, πιπέτες και μέσο DMEM.

https://x.com/pprfoundation/status/873113126455066625/photo/1 

Dr. Lee: Σήμερα θα σπείρουμε 50.000 κύτταρα HeLa ανά κοιλότητα σε πλάκα 24 κοιλοτήτων, χρησιμοποιώντας 500 μL μέσου ανά κοιλότητα. Αυτή η πυκνότητα κρατά τα κύτταρα σε λογαριθμική φάση ανάπτυξης και εξασφαλίζει συνεπή, αναπαραγόμενα αποτελέσματα.

(Επιδεικνύει τη διαδικασία.)

Κατά τη σπορά, πιπέταρε προσεκτικά στον τοίχο της κοιλότητας για να αποφύγεις φυσαλίδες και να εξασφαλίσεις ομοιόμορφη προσκόλληση. Μετά τη σπορά, οι πλάκες θα μπουν στον επωαστή για 12–18 ώρες ώστε τα κύτταρα να προσκολληθούν.

Eλένη: Γιατί ακριβώς 50.000 κύτταρα ανά κοιλότητα;

Dr. Lee: Εξαιρετική ερώτηση. Λιγότερα κύτταρα δεν θα έδιναν αξιόπιστα αποτελέσματα, ενώ πάρα πολλά θα οδηγούσαν σε υπερπλήρωση, περιορίζοντας την ανάπτυξη και εισάγοντας μεταβλητότητα.

Michael: Γιατί όχι περισσότερο μέσο;

Dr. Lee: Τα 500 μL είναι βελτιστοποιημένα για αυτές τις κοιλότητες. Περισσότερο μέσο θα αραιώσει τις συνθήκες στρες, ενώ λιγότερο θα εξαντλήσει τα θρεπτικά συστατικά πολύ νωρίς.

Ανακινήστε απαλά την ανάρτηση των κυττάρων πριν από τη σπορά για να αποφύγετε τα συσσωματώματα. Ακρίβεια και υπομονή είναι κρίσιμα. Ερωτήσεις πριν ξεκινήσουμε;

Ο Dr. Lee δείχνει τον επωαστή στους φοιτητές (ρυθμισμένος στους 37°C, ατμοσφαιρικό O₂, 5% CO₂) και τους προειδοποιεί να είναι προσεκτικοί, καθώς χρησιμοποιείται και από άλλες ομάδες. Οι φοιτητές σπέρνουν τα κύτταρά τους και τα τοποθετούν στον επωαστή.

Βιοδιαδικασία Διαδικτυακά:  https://www.bioprocessonline.com/doc/galaxy-s-co-incubator-0001 

Πηγαίνετε σε