Efecto de la temperatura sobre la actividad de la amilasa

Profesor: Ahora probaréis la actividad de la amilasa en diferentes temperaturas, utilizando la solución tampón de pH 7.0 óptimo. De nuevo, usaréis la solución de yodo (I₂/KI) para teñir el almidón de color azul oscuro y deberás observar un cambio de color a amarillo claro, lo que indica la presencia de maltosa. 

Materiales proporcionados para preparar las muestras:

   1. Cronómetro

   2. Hielo (4°C)

   3. Baño de agua a 22°C

   4. Baño de agua a 37°C

   5. Baño de agua a 100 °C

   6. Tubos de ensayo de vidrio

   7. Rotulador permanente

   8. Pipetas Pasteur

   9. Solución I2/KI 

  10. Solución de amilasa

  11. Solución de almidón al 1% 

  12. Solución tampón de fosfato 1M con pH 7.0

Procedimiento: 

1. Etiquetar cuatro tubos de ensayo con los nombres 1S, 2S, 3S, 4S usando el rotulador. Añadir 4 ml de solución de almidón al 1% en cada uno usando una pipeta Pasteur. Agregar 0.5 ml de solución tampón de pH 7.0 a cada tubo.

2. Colocar los cuatro tubos en las siguientes condiciones durante 20 minutos:

1. Tubo 1S en un baño de agua a 100 °C

2. Tubo 2S en un baño de agua a 22 °C

3. Tubo 3S en un baño de agua a 37 °C

4. Tubo 4S en hielo (4°C)

3. Etiquetar cuatro tubos de ensayo con los nombres 1E, 2E, 3E, 4E, usando el rotulador. Añadir la solución de amilasa en cada tubo de ensayo. 

4. Colocar los cuatro tubos en las siguientes condiciones durante 20 minutos:

1. Tubo 1E en un baño de agua a 100 °C

2. Tubo 2E en un baño de agua a 22 °C

3. Tubo 3E en un baño de agua a 37 °C

4. Tubo 4E en hielo (4°C)

5. Preparar seis tubos de ensayo nuevos y etiquétalos con los tiempos: 0 min, 2 min, 4 min, 6 min, 8 min, 10 min.  Añadir en cada uno, usando una pipeta Pasteur, una gota de solución de I₂/KI (yodo).

6. Mezclar el contenido del tubo 1S con el tubo 1E y colocar de nuevo la mezcla en el baño de agua a 100°C. Iniciar el cronómetro.

7. Inmediatamente, tomar 0.5 ml de la mezcla y agregar al tubo etiquetado como 0 min. Observar el cambio de color. 

8. Repetir el paso 7 con los tubos de ensayo de vidrio restantes hasta completar los 10 minutos. Observar cualquier cambio en el color de la mezcla y anotar el tiempo que tardó el color azul oscuro en volverse amarillo claro para cada reacción.

9. Repetir los pasos de 2 a 5 en los baños de agua a 37 °C, a 22 °C y a 4 °C.

12. Calcular la velocidad de cada reacción utilizando la fórmula 1/t.