Efectul temperaturii asupra activității amilazei

Prof. Popovici: Acum veți testa activitatea amilazei la diferite temperaturi, folosind soluția tampon optimă cu pH 7,0. Veți folosi din nou soluție de iod pentru a colora amidonul în albastru închis și va trebui să observați o schimbare a culorii în galben-deschis, indicând prezența maltozei.

Vi se oferă următoarele pentru a începe să vă pregătiți mostrele:

1.       Cronometru
2.       Gheață ( 4°C)
3.       Baie de apă la 22°C
4.       Baie de apă la 37°C
5.       Baie de apă la 100 °C
6.       Tuburi de sticla
7.       Marker
8.       pipete Pasteur
9.       I ₂ /KI soluție
10.    Soluție de amilază
11.    soluție de amidon 1%.
12.    Soluții tampon fosfat 1M la pH 7,0

Urmați pașii de mai jos:

1. Etichetați patru eprubete de sticlă ca 1S, 2S, 3S, 4S, folosind un marker. Adăugați 4 ml de soluție de amidon 1% în fiecare, respectiv, folosind o pipetă Pasteur. Adăugați 0,5 ml de soluții tampon fosfat 1M la pH 7,0 în fiecare eprubetă.

2. Așezați aceste patru eprubete, după cum este menționat mai jos, timp de 20 de minute:

1. Tub 1S în baie de apă 100 °C
2. Tubul 2S în baie de apă la 22 °C
3. Tubul 3S în baie de apă la 37 °C
4. Tubul 4S pe gheață ( 4°C)

3. Etichetați alte patru eprubete de sticlă ca 1E, 2E, 3E, 4E, folosind un marker. Adăugați soluție de amilază în fiecare, respectiv.

4. Așezați aceste patru eprubete, după cum este menționat mai jos, timp de 20 de minute:

1. Tubul 1E în baie de apă la 100 °C
2. Tubul 2E în baie de apă la 22 °C
3. Tubul 3E în baie de apă la 37 °C
4. Tubul 4E pe gheață ( 4°C)

5. Pregătiți șase tuburi de sticlă noi și etichetați-le ca 0 min, 2 min, 4 min, 6 min, 8 min, 10 min, folosind un marker. Folosind o pipetă pasteur , adăugați o picătură de soluție I _{2 /KI.}

6. Amestecați conținutul fiecărei eprubete 1S și 1E și puneți-le înapoi în baia de apă la 100 °C. Porniți cronometrul.

7. Se colectează imediat 0,5 ml din această soluție de amestec și se adaugă în eprubeta de sticlă marcată 0 min. Observați schimbarea culorii .

8. Repetați pasul 7 pentru eprubetele de sticlă rămase până la 10 minute. Observați orice modificări ale culorii amestecului și înregistrați timpul necesar pentru ca culoarea albastru închis să devină galben-deschis pentru fiecare reacție.

9. Repetați pașii 2 – 5 la 37 °C

1.       Repetați pașii 2 – 5 la 22 °C
2.       Repetați pașii 2 – 5 la 4 °C

12. Calculați viteza fiecărei reacții folosind formula 1/t.