Efectul pH-ului asupra activității amilazei

Prof. Popovici: Veți testa mai întâi activitatea amilazei în diferite soluții tampon de pH. Vom folosi soluție de iod pentru a colora amidonul în albastru închis. Îți amintești ce schimbare de culoare denotă prezența maltozei?

Vlad: Nu este un galben deschis, profesore? Îmi amintesc că am văzut un videoclip despre asta chiar zilele trecute după prelegerea ta.

Prof. Popovici: Așa este! Ce interval de pH ar trebui să testăm?

Tu: Având în vedere că aceasta este o enzimă care se găsește în corpul uman, pare rezonabil ca pH-ul optim să fie în intervalul 3,0-8,0.

Prof. Popovici: Foarte bine, atunci, să ne punem la punct.

Aveți la dispoziție următoarele materiale pentru a începe să vă pregătiți probele:

1. Cronometru
2. Gheaţă
3. Tuburi de sticla
4. Marker
5. Pipete Pasteur
6. Soluție iodată I₂ /KI.
7. Soluție de amilază
8. Soluție de amidon 1%.
9. Soluție tampon fosfat 1M la pH 3,0
10. Soluție tampon fosfat 1M la pH 7,0
11. Soluție tampon fosfat 1M la pH 8,0
12. Soluție tampon fosfat 1M la pH 10,0

Urmați pașii de mai jos:

1.       Luați o eprubetă de sticlă și etichetați „Control” folosind un marker. Folosind o pipetă pasteur , adăugați o picătură de soluție I2/KI și folosind o altă pipetă pasteur adăugați 1 ml soluție de amidon 1%. Această soluție ar trebui să devină albastru închis. Nu uitați să folosiți întotdeauna pipete pasteur diferite pentru fiecare soluție.
2.       Se prepară șase eprubete de sticlă cu o picătură de soluție I₂ /KI și 4 ml soluție de amidon 1%. Etichetați-le ca 0 min, 2 min, 4 min, 6 min, 8 min, respectiv 10 min, folosind un marker. Se adaugă 0,5 ml soluții tampon fosfat 1M la pH 3,0. Se amestecă bine.
3.       Se adaugă 0,5 ml de soluție de amilază (enzimă) 1% și se amestecă. Porniți cronometrul.
4.       Se colectează imediat 0,5 ml din soluția de amestec și se adaugă în eprubeta de sticlă marcată 0 min. Observați schimbarea culorii .
5.       Repetați pasul 4 pentru eprubetele de sticlă rămase până la 10 minute. Observați orice modificări ale culorii amestecului și înregistrați timpul necesar pentru ca culoarea albastru închis să devină galben-deschis pentru fiecare reacție.
6.       Repetați pașii 2 – 5 pentru soluțiile tampon fosfat 1M la pH 7,0
7.       Repetați pașii 2 – 5 pentru soluțiile tampon fosfat 1M la pH 8,0
8.       Repetați pașii 2 – 5 pentru soluțiile tampon fosfat 1M la pH 10,0
9.       Calculați viteza fiecărei reacții folosind formula 1/t.