Experimentul PCR

Te hotărăști să vizionezi un videoclip pentru a te ajuta să vizualizezi cum se realizează experimentul înainte de a-ți configura propria reacție:

Apoi, continui să examinezi ADN-ul izolat pentru transgena noveltina, folosind PCR. Utilizezi un martor pozitiv pentru reacție, care este ADN izolat de la un șoarece despre care s-a stabilit anterior că poartă transgena. Pentru martorul tău negativ, utilizezi apă distilată, în loc de o probă de ADN. Lungimea probei de ADN amplificat este de așteptat să fie de 370 de perechi de baze (pb).

Pregătești următorul amestec de reacție:

• 1.25 μl tampon polimerază A și 1.25 μl tampon polimerază  B (KAPA Taq PCR kit)
• 5 μl matriță ADN
• 1 μl primeri forward și reverse, respectiv
• 0.5 μl de dNTPs (KAPA Taq PCR kit)
• 0.1 μl KAPA Taq DNA polimerază (KAPA Taq PCR kit)
• Adaugă 25 μl de apă distilată pentru a ajunge la volumul final.

Setezi aparatul PCR la următoarele condiții:

• Denaturare: un ciclu de 3 min la 95^oC, legat de 35 de cicluri la 95°C timp de 1 minut
• Recombinare: la 65^oC timp de 1 min, la 72^oC timp de 1 min
• Extensie: urmat de o extensie finală la 72°C timp de 10 minute