Μοριακή κλωνοποίηση

Eρρίκος: Σωστά! Η πέψη με περιοριστικές ενδονουκλεάσες είναι κρίσιμη στην μοριακή κλωνοποίηση. Αυτή η τεχνική περιλαμβάνει τη χρήση περιοριστικών ενζύμων για την κοπή του DNA σε συγκεκριμένες αλληλουχίες, δημιουργώντας θραύσματα που μπορούν να εισαχθούν σε φορείς (όπως πλασμίδια). Αφού εισαχθούν, αυτοί οι φορείς μπορούν να μεταφέρουν το DNA σε κύτταρα-ξενιστές, επιτρέποντας τον πολλαπλασιασμό και την έκφρασή του.

Εσείς: Το θυμάμαι αυτό. Άσε να δω αν μπορώ να βρω τις σημειώσεις μου. Α, να τες, είναι αυτές που μας είχε δώσει τότε ο καθηγητής.

[Η ενίσχυση του DNA επιτυγχάνεται κυρίως μέσω της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR). Η PCR είναι μια διαδικασία που αντιγράφει εκθετικά συγκεκριμένες αλληλουχίες DNA. Χρησιμοποιεί ένζυμα DNA πολυμεράσης για τη σύνθεση νέων αλυσίδων DNA από ένα πρότυπο, με καθοδήγηση από ειδικούς εκκινητές. Αυτή η τεχνική δεν περιλαμβάνει τη δράση κοπής των περιοριστικών ενδονουκλεασών, καθώς επικεντρώνεται στην αντιγραφή υφιστάμενων αλληλουχιών DNA και όχι στην κατάτμησή τους.

Η αλληλούχιση γονιδιώματος επικεντρώνεται στον προσδιορισμό της σειράς των νουκλεοτιδίων σε ένα μόριο DNA. Οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες μπορεί να χρησιμοποιηθούν στην αρχική προετοιμασία του DNA για αλληλούχιση, με τη διάσπαση μεγάλων μορίων DNA.

Η πρωτεϊνοσύνθεση είναι η διαδικασία μέσω της οποίας τα κύτταρα δημιουργούν πρωτεΐνες, μεταφράζοντας τις γενετικές οδηγίες που φέρει το mRNA. Αυτή η διαδικασία πραγματοποιείται στα ριβοσώματα, χρησιμοποιώντας tRNA, mRNA και διάφορα ένζυμα. Η πέψη με περιοριστικές ενδονουκλεάσες είναι σημαντικό βήμα για την εισαγωγή DNA σε πλασμίδια, τα οποία στη συνέχεια μπορούν να μεταγραφούν και να μεταφραστούν εντός του κυττάρου-ξενιστή, οδηγώντας στη σύνθεση της πρωτεΐνης που κωδικοποιείται από την προστιθέμενη αλληλουχία DNA.

Πέψη του DNA με ενδονουκλεάσες.docx