Tampones de lisis

Tú: El tampón o buffer de lisis es responsable de desnaturalizar las proteínas y ayudar en la ruptura de tejidos y células.

Dr. Vázquez: ¡Exacto! ¿Recuerdas qué contiene para lograr esto?

Tú: ¿El tampón de lisis no contiene detergentes?

Dr. Vázquez: Así es, los detergentes ayudan a romper las células y tejidos, liberando su contenido, incluido el ADN. También ayudan a desnaturalizar proteínas, haciéndolas más accesibles para la digestión por la proteinasa K. Recuerda que en la primera parte del proceso de aislamiento de ADN, se añade proteinasa K al tampón de lisis (ATL).

[La enzima proteinasa K digiere proteínas, incluidas nucleasas que podrían degradar el ADN, y ayuda a lisar células y tejidos. Garantiza que el ADN se libere de los complejos proteína-ADN y permanezca intacto durante el proceso de purificación.]

Tú: Esto fue muy útil, Dr. Al entender el propósito de cada reactivo, ahora puedo apreciar mejor cómo funciona el proceso de purificación del ADN. Entiendo que se necesita ADN de alta calidad para la PCR. Procederé a aislar ADN de las colas de los ratones.

Dr. Vázquez: Buena suerte con tu primer aislamiento de ADN.

[Buffer o tampón AL/Etanol: El tampón AL contiene sales caotrópicas, que ayudan a lisar células y desnaturalizar proteínas y ácidos nucleicos. También facilita la unión del ADN a la membrana de sílice en la columna de centrifugado al interrumpir enlaces de hidrógeno e interacciones hidrofóbicas. El etanol se utiliza para precipitar el ADN y mejorar su unión a la membrana de sílice en la columna de centrifugado. Ayuda a eliminar contaminantes y facilita los pasos de lavado al hacer que el ADN sea menos soluble en la fase acuosa.]

Tampón de lavado 1 (AW1): La columna que contiene la muestra se lava con el tampón AW1. Este tampón de lavado contiene una baja concentración de sales caotrópicas y etanol. Ayuda a eliminar proteínas, sales y otros contaminantes del ADN unido a la membrana de sílice sin eluir el ADN.

Tampón de lavado 2 (AW2): La columna que contiene la muestra se lava con el tampón AW2. Este tampón de lavado contiene etanol, pero no sales caotrópicas. Limpia aún más el ADN eliminando cualquier contaminante restante, como sales y proteínas residuales, asegurando que la preparación final de ADN sea pura.

Tampón AE (o agua destilada): Este tampón de elución se utiliza para liberar el ADN purificado de la membrana de sílice. El tampón AE típicamente contiene Tris-EDTA, que ayuda a estabilizar el ADN y protegerlo de la degradación. También se puede usar agua destilada si se desea una elución más neutra.]