Digestia cu endonucleaze de restricție: Condiții optime

După ce ați stabilit importanța alegerii enzimei de restricție potrivite, Tu și Eric sunteți gata să treceți la aspectele practice ale digestiei. Înainte de a începe procedura, Dr. Preda vă reunește pe amândoi pentru o discuție despre crearea reactivilor și a condițiilor optime pentru experiment.

Dr. Preda: Înainte de a începe efectiv experimentul, trebuie să discutăm despre reactivii pe care îi vom folosi și despre condițiile optime pentru desfășurarea experimentului. Acestea includ aspecte precum pH-ul și temperatura. Vă amintiți reactivii și condițiile optime pentru digestia ADN-ului cu endonuclează de restricție cu EcoRI ?

Tu: Este o configurație experimentală destul de simplă, din câte îmi amintesc. Avem nevoie doar de ADN-ul suspectului, enzima de restricție, o soluție tampon și apă.

Dr. Preda: Corect! Dar condițiile experimentului?

Eric: Nu trebuie să efectuăm experimentul la un pH de 7,5? Pentru asta este soluția tampon și trebuie să incubăm amestecul la 37 ^°C.

Tu: Mi se pare corect, Dr. Preda. Sunteți de acord?

Dr. Preda: Bravo, corect! Vă amintiți de ce este important să se desfășoare experimentul la această temperatură și la acest pH?