Επίδραση του pH στη δραστικότητα της αμυλάσης

Καθηγητής Wilson: Θα δοκιμάσετε πρώτα τη δραστικότητα της αμυλάσης σε ρυθμιστικά διαλύματα με διαφορετικό pH. Θα χρησιμοποιήσουμε διάλυμα ιωδίου για να χρωματίσουμε το άμυλο σκούρο μπλε. Θυμάστε ποια χρωματική αλλαγή δηλώνει την παρουσία μαλτόζης;

James: Δεν είναι ανοιχτό κίτρινο, καθηγητά; Θυμάμαι ότι παρακολούθησα ένα βίντεο σχετικά με αυτό μόλις τις προάλλες μετά τη διάλεξή σας.

Καθηγητής Wilson: Σωστά! Ποιο εύρος pH πρέπει να εξετάσουμε;

Εσείς: Λαμβάνοντας υπόψη ότι πρόκειται για ένα ένζυμο που βρίσκεται στο ανθρώπινο σώμα, φαίνεται λογικό ότι το βέλτιστο pH θα ήταν στο εύρος 3,0-8,0.

Καθηγητής Wilson: Πολύ καλά, τότε, ας ξεκινήσουμε.

Σας παρέχονται τα ακόλουθα για να αρχίσετε να προετοιμάζετε τα δείγματά σας:

1. Χρονόμετρο

2. Πάγος

3. Γυάλινοι δοκιμαστικοί σωλήνες

4. Μαρκαδόρος

5. Πιπέτες Pasteur

6. Διάλυμα I2/KI (ιώδιο)

7. Διάλυμα αμυλάσης

8. Διάλυμα αμύλου 1%

9. Ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών 1Μ σε pH 3,0

10. Ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών 1Μ σε pH 7,0

11. Ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών 1Μ σε pH 8,0

12. Ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών 1Μ σε pH 10,0

Ακολουθείτε τα παρακάτω βήματα:

1. Παίρνετε έναν γυάλινο δοκιμαστικό σωλήνα και βάζετε την ετικέτα «Control» με μαρκαδόρο. Χρησιμοποιώντας μια πιπέτα pasteur, προσθέτετε μια σταγόνα διαλύματος I2/KI και χρησιμοποιώντας μια άλλη πιπέτα pasteur προσθέτετε 1 ml διαλύματος αμύλου 1%. Το διάλυμα αυτό θα πρέπει να γίνει σκούρο μπλε. Θυμηθείτε να χρησιμοποιείτε πάντα διαφορετικές πιπέτες pasteur για κάθε διάλυμα.

2. Ετοιμάζετε έξι γυάλινους δοκιμαστικούς σωλήνες με μία σταγόνα διαλύματος I2/KI και 4 ml διαλύματος αμύλου 1%. Χρησιμοποιώντας μαρκαδόρο, τους επισημαίνετε ως 0 λεπτά, 2 λεπτά, 4 λεπτά, 6 λεπτά, 8 λεπτά, 10 λεπτά αντίστοιχα. Προσθέτετε 0,5 ml ρυθμιστικών διαλυμάτων φωσφορικών 1Μ σε pH 3,0. Ανακατεύετε καλά.

3. Προσθέτετε 0,5ml διαλύματος αμυλάσης (ένζυμο) 1% και αναμιγνύετε. Εκκινείτε το χρονόμετρο.

4. Συλλέγετε αμέσως 0,5 ml του διαλύματος του μείγματος και το προσθέτετε στο γυάλινο δοκιμαστικό σωλήνα με την ένδειξη 0 λεπτά. Παρατηρείτε την αλλαγή του χρώματος.

5.Επαναλαμβάνετε το βήμα 4 για τους υπόλοιπους γυάλινους δοκιμαστικούς σωλήνες έως ότου συμπληρωθούν 10 λεπτά. Παρατηρείτε τυχόν αλλαγές στο χρώμα του μείγματος και καταγράφετε το χρόνο που χρειάστηκε για να γίνει το σκούρο μπλε χρώμα ανοιχτό κίτρινο για κάθε αντίδραση.

6. Επαναλαμβάνετε τα βήματα 2 - 5 για τα ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών 1Μ σε pH 7,0

7. Επαναλαμβάνετε τα βήματα 2 - 5 για τα ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών 1Μ σε pH 8,0

8. Επαναλαμβάνετε τα βήματα 2 - 5 για τα ρυθμιστικά διαλύματα φωσφορικών 1Μ σε pH 10,0

9. Υπολογίζετε τον ρυθμό κάθε αντίδρασης χρησιμοποιώντας τον τύπο 1/t.